豬藍耳病檢測的主要目的是測定豬血清中豬藍耳病毒抗體，可用于評估感染豬的血清學(xué)診斷以及豬藍耳病毒疫苗免疫狀況分析。
一、豬藍耳病檢測的檢驗原理：
本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）原理，由包被有高純度的豬藍耳病毒抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機理為包被抗原與樣本中的PRRSV-Ab結(jié)合，再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+PRRSV-Ab+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物，加入顯色劑，通過酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與PRRSV-Ab的量成正比，當(dāng)樣本反應(yīng)顯色后，經(jīng)酶標(biāo)儀檢測所得結(jié)果超過設(shè)定的臨界值時結(jié)果判為陽性，即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在。
二、豬藍耳病檢測的樣本要求：
1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無菌采集，2℃～8℃貯存應(yīng)不超過一周，長期應(yīng)在-20℃以下保存。
2．避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌及含疊氮鈉血清樣本。
三、豬藍耳病檢測的實驗準(zhǔn)備：
1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前，先取出置室溫30min，可以獲得較佳結(jié)果。.
2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋，稀釋的樣本混合均勻能取得較好結(jié)果。
3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍（例：將50ml洗滌液加入950ml去離子水中）。若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正常現(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可。
四、豬藍耳病檢測的檢驗方法：
1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條，檢測時，設(shè)陰、陽性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100μl于相應(yīng)孔中（可不設(shè)空白對照）。其余為樣本孔，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗）。
2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。
3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿反應(yīng)板孔，靜置10s左右，直接甩出，洗滌3次，洗滌后拍干板內(nèi)液體。
4．加酶：每孔加酶標(biāo)記物100μl。
5．溫育：加好酶標(biāo)記物后蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。
6．洗板：同步驟3。
7．顯色：每孔加顯色劑100μl，振蕩混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻，終止后即讀數(shù)。
9．讀數(shù)：以450nm/630nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。
五、豬藍耳病檢測的結(jié)果判定：
在酶標(biāo)儀上測各孔的OD值。檢測結(jié)果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.6，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.15；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定，S/P值計算時按以下方式處理:
S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD450/630值，PCx(—)表示陽性對照孔平均OD450/630值；
當(dāng)樣本的S/P≥0.2時判為陽性；樣品S/P值＜0.2時判為陰性；
若進行大量樣本檢測時，可使用試劑盒專業(yè)分析軟件進行分析數(shù)據(jù)結(jié)果。
