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產(chǎn)品目錄
大量DNA產(chǎn)物純化試劑盒
更新時(shí)間:2021-09-13 點(diǎn)擊量:2205


版本號(hào):08152012

MaxiDNA Purification Kit

大量 DNA 產(chǎn)物純化試劑盒

目錄號(hào):  K0517

保   存:  室溫

組分說(shuō)明

Cat.No.                                 K0517

KitSize                                   50

BufferPB                               60ml

BufferPS                                  15ml

BufferPW(concentrate)         10ml

BufferEB                                  10ml

SpinColumnDL                       50

CollectionTube(2ml)           50

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

      本試劑盒采用新型硅基質(zhì)膜技術(shù),通過(guò)快速簡(jiǎn)單的結(jié)合-洗滌-洗脫步驟即可從大量的 PCR 產(chǎn)物或酶反應(yīng)液(酶切,連接,探針標(biāo)記等)中純化 50 bp-50 kb 的 DNA 片段,純化過(guò)程中可有效去除引物、寡核苷酸、酶等雜質(zhì),從而獲得高純度,高濃度,完整性好的 DNA 片段,回收率高達(dá) 90%。本試劑盒回收純化的 DNA 可直接用于測(cè)序、連接和轉(zhuǎn)化、標(biāo)記、體外轉(zhuǎn)錄等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)

1.本試劑盒可無(wú)選擇性的回收溶液中所有 DNA 片段,如需選擇性回收特定片段,同時(shí)去除其他不同大小片段,請(qǐng)選擇我公司的膠回收試劑盒(K0524, 加 K2302,K0518 或 K0526)。

2.第--次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明在BufferPW中加入無(wú)水乙醇。

3.使用前請(qǐng)檢查BufferPB是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀,如有結(jié)晶或者沉淀現(xiàn)象,可在37℃水浴幾分鐘,即可恢復(fù)澄清。

4. 回收率與初始DNA量和洗脫體積有關(guān)。

5. 所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。

自備:無(wú)水乙醇,離心管


操作步驟

1.估計(jì)DNA反應(yīng)液的體積,加入5倍體積的Buffer PB,充分混勻(如DNA反應(yīng)體系為100µl,則加入500µlBufferPB,無(wú)需去除石蠟油或礦物油)。

注意:在加入BufferPB后檢測(cè)溶液的pH值,若pH值大于7.5,可向其中加入10-30 μl 的3M醋酸鈉(pH5.0),從而將pH值調(diào)到5-7。

2.柱平衡:向已裝入收集管(CollectionTube)中的吸附柱(SpinColumnDL)中加入200  μl Buffer PS,12,000rpm(~13,400×g)離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

3.將步驟1中所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中,室溫放置2分鐘,12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。

注意:吸附柱容積為700µl,若樣品體積大于700µl可分批加入 。

4. 向吸附柱中加入650 µl Buffer PW(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,

5. 將吸附柱放回收集管中。

6.注意:如果純化的DNA用于鹽敏感實(shí)驗(yàn)(例如平末端連接實(shí)驗(yàn)或直接測(cè)序),建議加入BufferPW后靜置2-5分鐘再離心。12,000rpm離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘,以*晾干。

注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。為確保下游實(shí)驗(yàn)不受殘留乙醇的影響,建議將吸附柱開(kāi)蓋,置于室溫放置數(shù)分鐘,以*晾干吸附材料中殘余的乙醇。

7. 將吸附柱放到一個(gè)新離心管(自備)中,向吸附膜中間位置懸空滴加100 µl Buffer EB(pH 8.5),室溫放置2分鐘。

8. 12,000rpm離心1分鐘,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。


注意:1)洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液,應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5之間(可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍)。

2)為了提高DNA的回收量,可將離心得到的溶液重新滴加到吸附柱中,重復(fù)步驟6。

3)洗脫體積不應(yīng)小于50μl,體積過(guò)少會(huì)影響回收率。

4)如果使用TE洗脫,需要考慮其中含有的EDTA是否會(huì)影響后續(xù)的酶促應(yīng)。

5)回收大于10kb的DNA片段時(shí),BufferEB應(yīng)在50℃水浴中預(yù)熱,適當(dāng)延長(zhǎng)吸附和洗脫時(shí)間,可增加回收效率。



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