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大鼠腦膠質瘤細胞(C6)
更新時間:2020-06-12 點擊量:1848

               大鼠腦膠質瘤細胞(C6)

 

細胞介紹

膠質細胞株C6是由Benda等用N-nitrosomethylurea誘導的大鼠膠質瘤克隆,并經過一系列的體外培養和動物傳代交替后建成的。當細胞從低密度生長到滿瓶時,S-100產量增加10倍

 

細胞特性

1) 來源:大鼠,膠質瘤

2) 形態成纖維細胞,貼壁生長

3) 含量:>1x106

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

 

運輸和保存:可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式:1干冰運輸,收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇;2存活細胞收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

 

細胞用途:僅供科研使用。

 

細胞接收后的處理:

1) 收到細胞后,請檢查發貨培養瓶的狀況,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。

2) 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時,hao在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B請在10X和20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態的依據。

3) 觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。

4) 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象,如發現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基的原培養瓶中(或新的培養瓶中)。

5) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基)。

6)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。  收到細胞后第yi次傳代建議1:2傳代 。

 

                       

細胞培養步驟

一.培養基培養凍存條件準備:

1) 準備F12K(推薦iCell-0007培養基;馬血清,15%;優質胎牛血清,2.5%;雙抗,1%。注:單一血清培養細胞的不能保證細胞狀態。

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液90%血清,10%DMSO,現用。

二. 細胞處理

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中加入8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,可進行傳代培養。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2

2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 收到細胞后*傳代推薦將細胞懸液按1:2的比例分到新的6ml培養基的新皿中或者瓶中,建議凍存一支備用,后續傳代根據實際情況按1:2到1:5的比例進行。

3)細胞凍存:細胞生長狀態良好時,進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進行凍存。

下面T25瓶為類;

      1,細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入1ml血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。

      2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據細胞數量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度不低于1x10E6/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。

      3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

 

注意事項:

1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。

2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性必須在二級生物安全內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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